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    Favorgen下FavorPrep™ Tri-RNA 試劑的操作使用

    發(fā)布時(shí)間: 2021-07-07  點(diǎn)擊次數(shù): 1067次

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    FavorPrep™ Tri-RNA 試劑

     

    FavorPrep™ Tri-RNAReagent 是一種來(lái)自改進(jìn)的苯酚和異硫氰酸胍 (GSN) 方法的試劑,用于單步 RNA 分離。在樣品勻漿或裂解過(guò)程中,Tri-RNA 試劑保持 RNA 的完整性,同時(shí)破壞細(xì)胞和溶解細(xì)胞成分。 Tri-RNA 試劑的組成包括苯酚和 GSN 的單相溶液。生物樣品在 Tri-RNA 試劑中勻漿或裂解,勻漿通過(guò)添加氯仿、渦旋和離心分離成水相和有機(jī)相。 RNA 僅保留在水相中(透明的上相),DNA 保留在中間相中,蛋白質(zhì)保留在有機(jī)相中(紅色)。通過(guò)加入異丙醇從水相中沉淀 RNA 并溶解/濃縮。如果需要,可以分別用乙醇和異丙醇從中間相和有機(jī)相中依次沉淀 DNA 和蛋白質(zhì),然后溶解/濃縮。

     

    特征

     

    ★ 一步法從組織、細(xì)胞、細(xì)菌、植物、酵母和生物體液中分離總RNA

     

    ★ 整個(gè)RNA分離過(guò)程不到1小時(shí)。

     

    ★ 純化后的RNA可應(yīng)用于:RT-PCRNorthern雜交、RNase保護(hù)、Poly-A+RNA篩選、差異展示和微陣列分析。應(yīng)用

     

    100 次使用 儲(chǔ)存: 4℃ 棕色玻璃瓶中,供日常使用

     

    程序:

     

    1. 1 ml Tri-RNA Reagent 加入 100 mg 組織(或從最多 10 ml 血液或 106 個(gè)培養(yǎng)細(xì)胞中沉淀的血液 RNA 病毒,或 10 cm2 培養(yǎng)板)

    2. Tri-RNA Reagent 中使用玻璃 Teflon Polytron 勻漿器勻漿組織樣品(培養(yǎng)細(xì)胞可以通過(guò)重復(fù)移液裂解;濃縮的血液 RNA 病毒可以通過(guò)劇烈渦旋裂解)。

    3. 將勻漿在室溫下放置 5 分鐘。

    4. 加入 0.2 ml 氯仿(未提供)并劇烈混合。

    5. 12,000 rpm 離心 3 分鐘以分離各相,RNA 在透明的上層水相中。

    6. RNA 相轉(zhuǎn)移到干凈的管中。

    7. 加入 1x 體積的異丙醇,渦旋以沉淀 RNA,在室溫下放置 10 分鐘,然后以 12,000 rpm 離心 15 分鐘。

    8. 去除上清液。

    9. 0.5 ml 冰冷的 70% 乙醇清洗 RNA 沉淀,12,000 rpm 離心 1 分鐘,小心除去上清液。

    10. 短暫旋轉(zhuǎn)以確保 RNA 沉淀沉淀到管的側(cè)壁,然后小心地去除任何殘留的上清液,不要接觸 RNA 沉淀。

    11. RNA 重懸在少量 TE,pH8.0

     

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