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TOM-酰胺在RNA合成中的亮點(diǎn):1,2
ChemGenes 根據(jù)GMP準(zhǔn)則生產(chǎn)2' - O-三異丙基甲硅烷基-氧基甲基(TOM)酰胺。ChemGenes擁有完善的技術(shù),可以以優(yōu)惠的價(jià)格生產(chǎn)大量(千克級(jí)批次)TOM酰胺。
TOM酰胺非常適合大規(guī)模治療級(jí)RNA合成,長(zhǎng)RNA序列,適體,siRNA和生物學(xué)上重要的RNA分子。
以下品質(zhì)使TOM酰胺成為治療性寡核苷酸生產(chǎn)的理想選擇。
像DNA酰胺一樣,TOM酰胺具有更高的偶聯(lián)效率。觀察到的每步耦合效率始終> 98%。
較高的耦合效率歸因于TOM組的較低位阻。
快速的偶聯(lián)時(shí)??間(對(duì)于不同規(guī)模的合成,需要2-4分鐘),并且*沒(méi)有3'雜質(zhì)。
N保護(hù)基團(tuán)的脫保護(hù)時(shí)間短,取決于鏈長(zhǎng)和大量的水,時(shí)間為4-6小時(shí)。
使用的不穩(wěn)定的堿保護(hù)基是(N -Ac-A;N -Ac-C和N -Ac-G)。
在溫和條件下和大量過(guò)量的水中可輕松去除TOM保護(hù)基,而*。
對(duì)使用TOM酰胺合成的寡核苷酸質(zhì)量的研究表明,使用TOM酰胺合成的RNA寡核苷酸經(jīng)過(guò)單次離子交換純化并通過(guò)CE(圖1)和ESI / MS分析進(jìn)行分析后,其質(zhì)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于其他寡核苷酸。
使用TOM酰胺化學(xué)法可整體上減少時(shí)間。所有步驟,即。,堿基脫保護(hù),TOM脫保護(hù)和易于純化。除了高產(chǎn)率之外,該方法還導(dǎo)致高純度。
圖1:使用2'- O- TOM酰胺的HPLC純化的12-mer RNA(12μmol 規(guī)模)的毛細(xì)管凝膠電泳(CE)。
華新康信有TOM-酰胺 ChemGenes大量現(xiàn)貨,歡迎電聯(lián)。
確認(rèn)沒(méi)有甲醛加合物形成的研究:
在甲硅烷基的損失和甲醛的產(chǎn)生期間,不會(huì)導(dǎo)致核苷堿基的C-5甲酰化或N-甲?;?。這是由于存在aq。TRIS緩沖液(pH 7.4),可捕獲所有產(chǎn)生的甲醛并防止任何堿修飾(方案1)。從ESI / MS分析光譜數(shù)據(jù)可以明顯看出這些結(jié)果。質(zhì)譜數(shù)據(jù)均未顯示對(duì)應(yīng)于羥甲基加合物(CH2-OH)的任何峰,無(wú)論是單個(gè)單元(M + 30)還是多個(gè)M + 30單元(圖2a和圖2b)。這些結(jié)果說(shuō)明了使用TOM酰胺的清潔RNA合成。
方案1: TOM脫保護(hù)和捕獲甲醛的示意圖。
圖2: ESI MS分析確認(rèn)沒(méi)有M + 30或M + 30加合物的倍數(shù);目標(biāo)MS為3715.3(實(shí)測(cè)值為3715.3)。
RNA合成:
RNA的重要性早已在細(xì)胞過(guò)程中得到認(rèn)可。關(guān)注的主要領(lǐng)域是反義RNA 1和催化RNA在剪接和連接中的作用。2定義序列的化學(xué)合成RNA是開(kāi)發(fā)和了解RNA的作用和應(yīng)用的基礎(chǔ)。使用RNA聚合酶的酶促方法是模板依賴性的,因此不是受控序列合成。3 RNA的化學(xué)合成已經(jīng)完善到一定程度,可以有效地產(chǎn)生長(zhǎng)序列,例如具有生物活性的76-mer tRNA和多毫克量。4
小干擾RNA:
自線蟲(chóng)秀麗隱桿線蟲(chóng)5的描述以來(lái)RNAi已成為一種功能強(qiáng)大且廣泛使用的基因下調(diào)工具,Andrew Fire和Craig Mello榮獲2006年諾貝爾醫(yī)學(xué)獎(jiǎng),以表彰RNAi機(jī)制的發(fā)展。RNAi途徑由稱(chēng)為Dicer的內(nèi)源性核糖核酸酶啟動(dòng),該酶將長(zhǎng)dsRNA分子加工成21-23個(gè)核苷酸的長(zhǎng)siRNA分子的短片段,兩個(gè)核苷酸3'突出端。siRNA分子整合到RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體(RISC)中,兩條siRNA鏈之一解開(kāi)。在RISC中關(guān)聯(lián)的單鏈反義分子序列選擇性結(jié)合特定的mRNA轉(zhuǎn)錄物,并且來(lái)自該復(fù)合物的內(nèi)切核酸酶切割目標(biāo)mRNA。從近幾年開(kāi)始6
RNAi提供了在細(xì)胞水平上了解和處理人類(lèi)疾病的天文潛力。在廣闊且迅速發(fā)展的siRNA領(lǐng)域中,該領(lǐng)域的一些重要進(jìn)展是對(duì)細(xì)胞生物學(xué)和功能基因組學(xué)領(lǐng)域的自然調(diào)控機(jī)制的預(yù)測(cè)。預(yù)期這將導(dǎo)致基于基因的藥物發(fā)現(xiàn)。目前,*許多研究人員都極力主張進(jìn)行基因控制,基因敲除和靶標(biāo)驗(yàn)證。短dsRNA 通過(guò)化學(xué)合成獲得。ChemGenes專(zhuān)業(yè)生產(chǎn)高純度的RNA單體,用于該領(lǐng)域的研究和進(jìn)一步開(kāi)發(fā)。
乙硫基四唑(ETT)和苯硫基四唑(BMT)的用途:
已證明在合成中使用ETT或BTT作為激活劑可提高每個(gè)步驟的偶聯(lián)效率。
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產(chǎn)品貨號(hào) 產(chǎn)品名稱(chēng) 品牌 規(guī)格
Macosko-2011-10(V+) Barcoded microparticles Chemgenes 10umol
DMT-1972 Extra large Drying Traps ChemGenes pack 10
DMT-1973 Large Drying Traps ChemGenes pack 10
"DMT-1975" Small Drying Traps ChemGenes pack 10
N-4000-03 "Universal UnyLinker Support ChemGenes
N-4000-05 Universal UnyLinker Support 500 ChemGenes 1g
N-4000-20 Universal UnyLinker Support 2000 ChemGenes 1g
N-4000-10 Universal UnyLinker Support 1000 ChemGenes 1g
DN-1597 chemgenes 100mg
DN-6493 chemgenes 100mg